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El síndrome multisistémico de adelgazamiento post-destete o circovirosis porcina (CP) es una de las enfermedades más importantes que afecta el ganado porcino a nivel mundial. La CP se caracteriza clínicamente por un retraso del crecimiento, pérdida de peso, dificultad para respirar, fiebre, diarrea y muerte en las etapas de transición y/o engorde. El agente etiológico esencial de la CP es el circovirus porcino tipo 2 (PCV2), el virus más pequeño conocido que infecta mamíferos. Los hallazgos histopatológicos que definen la CP son la depleción linfocitaria y la infiltración histiocítica y/o la presencia de células gigantes multinucleadas en los tejidos linfoides; en algunos casos, se acompañan de inclusiones virales intranucleares e intracitoplasmáticas en los macrófagos. Ultraestructuralmente, el PCV2 ha sido descrito como un virus sin envoltura, con 12 a 23 nm de diámetro.

Varios estudios han descrito diferentes propiedades biológicas del virus. Se conoce que la adherencia a la membrana celular, así como la internalización de PCV2, ocurre por endocitosis mediada por clatrina, y el ciclo completo de replicación del virus es alrededor de 24-36 horas. Uno de los enfoques más clásicos para dilucidar el ciclo viral en diferentes tipos celulares incluye estudios de microscopía electrónica. Sin embargo, al inicio de esta tesis, se disponía de poco conocimiento sobre la localización subcelular de PCV2 en células infectadas in vitro, así como en los tejidos de cerdos naturalmente afectados por CP. En razón de ello, el objetivo principal del presente trabajo doctoral fue estudiar las alteraciones ultraestructurales asociadas a la infección por PCV2 y determinar la localización del virus a nivel subcelular, describiendo la morfogénesis de PCV2 en los cultivos celulares y evaluando los hallazgos ultraestructurales relacionados con partículas consistentes con PCV2 (VLPs) en los linfonodos de cerdos afectados con CP.

En el primer estudio de la tesis (Capítulo 3) se describió la morfogénesis completa de PCV2 en un clon de la línea de células linfoblastoides L35 (células L35), a través de técnicas de microscopía electrónica. Las células fueron infectadas con PCV2, con una multiplicidad de infección de 10, y se evaluaron diferentes tiempos postinfección (0, 6, 12, 24, 48, 60 y 72 horas postinfección, hpi). Después de la internalización por endocitosis, se describió una primera fase citoplasmática, en la que las partículas de PCV2 formaban inicialmente agregados o cuerpos de inclusión intracitoplasmáticas (ICIs). Posteriormente, PCV2 se mostró estrechamente relacionado con las mitocondrias. Subsiguientemente, se observaron factorías virales (VFs) en el núcleo celular. La membrana nuclear aparentemente participa en el ensamblaje viral y la encapsidación. Los viriones inmaduros salen del núcleo, y en una segunda fase citoplasmática se forman nuevas ICIs. Los cambios de las organelas asociados a la infección por PCV2 fueron evaluados por inmunomarcaje con oro coloidal. El marcaje con oro coloidal fue observado en las ICIs, no siendo así en cuerpos de inclusión intranucleares (INIs). Los resultados obtenidos sugieren que, al final del ciclo de replicación viral (entre 24 y 48 hpi), el PCV2 fue liberado de la célula por dos vías diferentes: por gemación de grupos virales o por lisis de células apoptóticas/muertas.

Para desarrollar el segundo y el tercer estudios (Capítulos 4 y 5 de la tesis) se tomaron muestras de linfonodos procedentes de animales con CP y animales sanos (control). Se observaron cambios significativos principalmente en los histiocitos que infiltraban los tejidos linfoides, solamente en animales con CP. Los cambios ultraestructurales más significativos fueron: proliferación y marcada degeneración mitocondrial, proliferación y dilatación del retículo endoplásmico rugoso y del complejo de Golgi. Se observó un número significativo de ICIs próximos a estas organelas, los cuales se mostraban manifiestamente alteradas. Los ICIs se clasificaron como pequeñas o grandes, estaban delimitadas por una doble membrana, y mostraron un aspecto granular o conteniendo redes de VLPs paracristalinas. Solamente algunos histiocitos mostraron también INIs, los cuales no presentaban membrana alrededor. Las VLPs con forma icosaédrica tenían entre 8 y 17 nm de diámetro y fueron marcadas con un anticuerpo monoclonal anti-PCV2. Las VFs a menudo se encontraban adyacentes a mitocondrias marcadamente degeneradas, las cuales eran positivas al inmunomarcaje con oro coloidal. Como se esperaba, la depleción linfoide fue un hallazgo remarcable de los linfonodos procedentes de cerdos afectados con CP. Los estudios de colocalización a través estudios de microscopía confocal y por microscopía electrónica indicaron la relación entre las VFs y las mitocondrias, sugiriendo que estas organelas pudieran tener un papel en la replicación de PCV2. Los presentes hallazgos constituyen un soporte adicional a la hipótesis que el virus se replica en los histiocitos de los linfonodos.

En resumen, la presente tesis incluye el primer estudio de morfogénesis de PCV2 en cultivos celulares, así como aporta descripciones ultraestructurales detalladas de linfonodos procedentes de cerdos con CP. Los resultados obtenidos permiten complementar los trabajos existentes sobre el ciclo de replicación de PCV2 en cultivos celulares y obtener nuevos conocimientos en la patogénesis de la CP. Una de las mayores contribuciones de la presente tesis es la descripción de la íntima asociación entre PCV2 y las mitocondrias.